Microscopía de fluorescencia frente a la microscopía óptica

La microscopía de fluorescencia y la microscopía óptica representan técnicas de imagen especializadas para visualizar células o componentes celulares, aunque tienen capacidades y usos ligeramente diferentes. Esencialmente, el microscopio de fluorescencia es una forma de microscopio óptico que utiliza muchas características adicionales para mejorar las habilidades.

Microscopio de fluorescencia
Microscopio de fluorescencia

¿Qué es la microscopía óptica?

El microscopio óptico, como su nombre indica, utiliza luz visible y lupas para ver objetos pequeños. Los microscopios ópticos son la primera forma de equipo de imágenes de mejor calidad del siglo XVI y se utilizaron por primera vez para estudiar células.

Una forma común de ver células o tejidos con microscopios ópticos es usar tintes. Puede teñir los componentes básicos, como la combinación del tinte de hematoxilina y eosina más comúnmente utilizado, haciendo que el núcleo sea morado y el citoplasma rosado. Sin embargo, también existen técnicas de pintura más específicas.

En los hospitales, es posible que los médicos deban examinar las células rápidamente. En tales casos, la microscopía óptica se puede utilizar con tejido congelado en dióxido de carbono y cortado con un micrótomo. Este método más simple se puede utilizar en situaciones de emergencia para guiar al cirujano en los pacientes en el quirófano.

¿Qué es un microscopio de fluorescencia?

Con el desarrollo del microscopio óptico, se inventaron más formas utilizando diferentes técnicas. Uno de los tipos de microscopía en el grupo más grande de microscopios ópticos es la microscopía de fluorescencia. La microscopía fluorescente toma fotografías de células o moléculas marcadas con un tinte fluorescente. Las sustancias fluorescentes se denominan fluoróforos y se incluyen en la muestra.

Los fluoróforos son excitados por la luz del microscopio, lo que hace que emitan luz con menor energía y longitudes de onda más largas. No es la fuente de luz original, sino esta luz la que crea la imagen ampliada. Esto significa que la microscopía de fluorescencia utiliza luz reflejada en lugar de luz transmitida.

Un marcador común es la proteína fluorescente verde, por ejemplo, que es estimulada por luz azul y emite luz verde con una longitud de onda más larga. Los filtros alrededor de la muestra pueden separar la luz fluorescente de la radiación circundante.

La microscopía de fluorescencia se usa ampliamente para visualizar estructuras o características celulares, verificar la viabilidad celular, visualizar material genético (ADN y ARN) y visualizar células específicas en una población más grande.

microscopia de fluorescencia
Esquema de la microscopía de fluorescencia

Comparación entre microscopio óptico y microscopio de fluorescencia

Como se mencionó anteriormente, los microscopios ópticos utilizados para microscopía óptica utilizan luz visible para hacer visibles las muestras. Esta luz está entre 400 y 700 nm, mientras que la microscopía de fluorescencia usa luz mucho más intensa.

La utilidad de la microscopía óptica convencional se ve obstaculizada por el hecho de que se utiliza luz visible, ya que el uso de luz visible limita la resolución obtenida de las muestras. Por el contrario, la microscopía de fluorescencia no está sujeta a esta limitación porque utiliza cualquier luz que estimule los fluoróforos.

Los microscopios ópticos tradicionales se utilizan ampliamente y, a menudo, requieren tonos más simples para revelar un contraste que es invisible en la naturaleza. Esta es generalmente una técnica más simple que la microscopía de fluorescencia. Por esta razón, se utiliza en entornos clínicos como la obtención de imágenes instantáneas de biopsias y muestras de frotis de cuello uterino en hospitales.

El microscopio de fluorescencia se puede utilizar junto con otros tipos de microscopía óptica. Debido a que las imágenes consisten en luz reflejada (en lugar de luz directa), se pueden usar con técnicas como la microscopía de contractura de fase.

Además, existen técnicas de microscopía óptica que se pueden utilizar para visualizar muestras en vivo y estacionarias. Sin embargo, puede haber un equilibrio entre la relación señal/ruido y el daño de la muestra durante el proceso de observación. Durante la microscopía de fluorescencia, las células se vuelven blancas y la fluorescencia disminuye durante largos períodos de observación. Finalmente, hay flexibilidad.

Observación microscopio de fluorescencia
Observación con un microscopio de fluorescencia

Fuentes:

https://serc.carleton.edu/microbelife/research_methods/microscopy/fluromic.html

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